Dviejų bangų ilgio nustatymo atveju trukdančių medžiagų šviesa paprastai turi šviesos sklaidą ir nespecifinę šviesos sugertį, todėl būtina nustatyti pagrindinį bangos ilgį ir subbangos ilgį, o pagrindinis bangos ilgis yra būdinga šviesos sugerties smailė. bandoma medžiaga. Subbangos ilgio nustatymo principas yra tas, kad trukdančių medžiagų sugertis pagrindiniame bangos ilgyje yra kuo artimesnė subbangos ilgio absorbcijai. Ta pati absorbcijos smailė, todėl gali pašalinti hemoglobino trukdžius. Todėl kuo arčiau trikdančiojo pirminio bangos ilgio ir antrinio bangos ilgio, tuo geriau.
Matavimo reikalavimai
1. Mėginys: serumas, šlapimas, smegenų skystis ir kt.
2. Reagentai: vienas reagentas, dvigubas reagentas
3. Dvigubas bangos ilgis: du bangos ilgiai, sudaryti iš pagrindinio bangos ilgio ir subbangos ilgio. Galima pašalinti trikdžius aptikimo procese.
4. Kalibratorius (standartinis): palyginkite nežinomų mėginių koncentraciją
5. Kokybės kontrolės medžiaga: naudojama prietaisų, reagentų ir kt. būklei stebėti kasdieniame biocheminio instrumento darbe.
metodas
1. Galutinio taško metodas (endessay) visiškai paverčiamas produktais, o reakcija nebevykdoma, kad būtų pasiektas galutinis taškas, o reakcijos pabaigos taško absorbcija imama apskaičiuojant tiriamos medžiagos koncentraciją. Atliekant biocheminius tyrimus, išskyrus fermentus, BUN ir CRE, aptikimui naudojami galutinio taško metodai.
1). Vieno taško pabaigos taško metodas: rezultatui apskaičiuoti paimkite taško absorbciją, kai reakcija pasiekia galinį tašką.
2). Dviejų taškų galutinio taško metodas: paimkite vieno taško absorbciją prieš prasidedant reakcijai, o tada – antrojo taško absorbciją, kai reakcija pasiekia galutinį tašką. Apskaičiuokite rezultatą, atėmę absorbciją antrame taške atėmus absorbciją pirmame taške. Daugiausia naudojamas reagentams ir tuščiųjų mėginių ėminiams atimti. Užtikrinti rezultatų tikslumą. Paprastai naudojamas dvigubiems reagentams.
2. Fiksuoto laiko metodas (dviejų taškų metodas): norint apskaičiuoti rezultatą, imamas skirtumas tarp dviejų reakcijos taškų. Šie du taškai nėra nei reakcijos pradžios, nei pabaigos taškas. Dažniausiai naudojamas kai kuriems nespecifiniams elementams, pvz., kreatininui, aptikti.
3. Nepertraukiamo stebėjimo metodas (kinetinis metodas, greičio metodas): matuojant fermentų aktyvumą arba fermentų metabolitus, rezultatui apskaičiuoti nuolat imama absorbcijos vertė (△; A/min), kuri reakcijos kreivėje kinta tiesiškai. Ji taip pat vadinama nulinės eilės reakcija, nes tiesinės reakcijos metu absorbcijos skirtumas tarp taškų yra lygus nuliui.